Taq酶

Taq酶主要用于对保真性要求不高的PCR扩增和荧光定量PCR，为方便用户对镁离子浓度的调整，所有的buffer都是不含镁离子的，镁离子单独包装。
Taq酶特征
• 克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表达后，再经三次过柱纯化分离出来的一个约 94 KD 的重组蛋白。
• 具有 5' 到 3‘合成 DNA 的能力；无3 '到 5‘外切酶的活性。
• 具有 5 ' 到 3 ‘外切酶的活性， 特别适合用于荧光定量PCR 。
• 具有 3‘端加 A 的功能，产物经纯化后可直接用于T－A克隆。
• 无外源核酸酶和细菌 DNA 污染。
• SDS － PAGE 检测，纯度＞ 95% 。
• 最佳延伸温度 72 ℃ ，最佳 Mg 2+ 浓度 1.5mM ，最佳 dNTPS 浓度 0.2mM , 延伸速度为 2000base/min 。
• 10 × PCR buffer: 500mM KCl, 100mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ), 1% TritonX-100 和 15mM MgCl2 。
• Storage buffer: 20mM Tris-HCl (pH 8.0), 100mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50%甘油， 0.5% Nonidet -P40 和 0.5% Tween20 。
Taq酶单位定义
在 74℃ 条件下， 30 分钟内催化 10nmol dNTP 的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。反应条件为： 50mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ), 50mM NaCl, 5mM MgCl2, 200mM dNTP( 含未标记和标记 [3H] dTTP ), 10mg 活化的小牛胸腺 DNA 和 0.1mg/ml BSA, 终反应体积为 50ml 。
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